En nuestra 5ta semana de pasantía realizamos un cultivo primario de miocardiocitos (el cual lo podemos observar a la derecha de nuestra pantalla). El mismo consiste en la obtención de una célula a partir de un órgano como se el corazón. Utilizamos ratones de no más de 3 a 5 días de vida, a los cuales dentro de una campana, obtuvimos el corazón, colocándolo en una placa de Petri con un buffer previamente preparado que contenía: ClK + PO4H2k + ClNO + Fosfato ácido de Sodio + PO4HNa2
Se prepara este Buffer ya que con todas estas sales son las que logran que el corazón continué vivo.
Continuando con el práctico, se hicieron varios lavados con el buffer para poder quitar la sangre que el órgano desparramaba sobre la placa de Preti.
Luego trituramos los corazones dentro de la misma placa de Petri, que luego fueron colocados el un tubo falcon al cual se le agrego una solución de Tripsina, la cual es una enzima peptidasa, que rompe los enlaces de las proteínas mediante hidrólisis para formar péptidos o aminoácidos de menor tamaño. La misma actúa a 37°C por eso llevamos el tubo dentro de un agitador a 37°C durante 15 min. La primera agitación elimina glóbulos rojos y sangre del corazón. Luego se realizan 4 lavados, cada uno con la solución de Tripsina, donde se obtienen las células del órganos en solución.
Obtenido el sobrenadante se centrifuga a 1000 RPM durante 4 min. donde se obtuvo un pellet de células que fueron colocadas en un frasco de cultivo donde se dejan adherir los fibroblastos quedando en el medio de cultivo: Los Miocardiocitos. Luego se sacan estas células y se la coloca en placas de 6 wells en medio de cultivo al 10% de SFB para que se adhieran y dividan. El medio se le cambia cada día por medio y antes de realizar el ensayo se le baja el % de suero al 5%.
Acá les compartiremos algunas imágenes vistas por nosotros en el microscopio del cultivo primario de miocardiocitos
Se prepara este Buffer ya que con todas estas sales son las que logran que el corazón continué vivo.
Continuando con el práctico, se hicieron varios lavados con el buffer para poder quitar la sangre que el órgano desparramaba sobre la placa de Preti.
Luego trituramos los corazones dentro de la misma placa de Petri, que luego fueron colocados el un tubo falcon al cual se le agrego una solución de Tripsina, la cual es una enzima peptidasa, que rompe los enlaces de las proteínas mediante hidrólisis para formar péptidos o aminoácidos de menor tamaño. La misma actúa a 37°C por eso llevamos el tubo dentro de un agitador a 37°C durante 15 min. La primera agitación elimina glóbulos rojos y sangre del corazón. Luego se realizan 4 lavados, cada uno con la solución de Tripsina, donde se obtienen las células del órganos en solución.
Obtenido el sobrenadante se centrifuga a 1000 RPM durante 4 min. donde se obtuvo un pellet de células que fueron colocadas en un frasco de cultivo donde se dejan adherir los fibroblastos quedando en el medio de cultivo: Los Miocardiocitos. Luego se sacan estas células y se la coloca en placas de 6 wells en medio de cultivo al 10% de SFB para que se adhieran y dividan. El medio se le cambia cada día por medio y antes de realizar el ensayo se le baja el % de suero al 5%.
Acá les compartiremos algunas imágenes vistas por nosotros en el microscopio del cultivo primario de miocardiocitos
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