Semana 9

En esta semana hicimos las calles del western blot. Teniamos 10 calles debido a que previamennte habíamos utilizado un peine de 8 dientes, quien logro separar el gel en 10 partes.
De esta manera hicimos las calles, sembrando los siguiente en cada una de las calles:
OBJETIVO: Buscamos Metealoproteasa MMP-9

Calle 1:-SD- MFS con LPS (Control)
Calle 2:Marcador Molecular
Calle 3:-SD- MFS sin LPS
Calle 4:-SD- MFS con LPS
Calle 5:-SD- Miocardiocitos
Calle 6:-SD- Miocardiocitos concentrados
Calle 7:-SD-Miocardiocitos "el resto" del filtrado
Calle 8:Control (+)
Calle 9:Idem 5
Calle 10:Idem 6


calle 1:-SD- 24hs (Control)
calle 2:Marcador Molecular
calle 3:-LIS-COntrol
calle 4:-LIS-MFS 6hs
calle 5:-LIS-MFS 24hs
calle 6:-SD- Control
calle 7:-SD-MFS 6hs
calle 8:-SD-MFS 24hs
calle 9:Control (+)
calle 10:Idem 4

Obsercaciones: las puntas(calles 1; 10) no siempre salen bien; estas no llevan anticuerpo

- SD - Sobrenadante - LIS- Lisado
Primer anticuerpo reconoce las proteínas

Segundo anticuerpo reconoce otro anticuerpo (el revelado sale mal)

Resultado: Al llegar al revelado, todo lo que se revela es por presencia del primer anticuerpo, en caso de aparecer revelado algo en el control esta mal.

El segundo que hicimos fue sobre HOMOGENATOS DE PIELES DE ANIMALES
OBJETIVO: Buscamos MMP-9
HM: Homogenatos

Calle 1:Idem 6
Calle 2:Marcador
Calle 3:-HM-
Calle 4: Piel Inoculamos 300000 MFS sin LPS
Calle 5: Piel Inoculamos 300000 MFS con LPS
Calle 6: Piel Inoculamos 500000 MFS sin LPS
Calle 7: Piel Inoculamos 500000 MFS con LPS
Calle 8:-HM- Corazon
Calle 9: Idem 7
Calle 10: Idem 8

Calle 1:
Calle 2:Marcador
Calle 3:-HM- Control
Calle 4: Piel 300000 Miocardiocitos
Calle 5: Piel 500000 Miocardiocitos
Calle 6: Piel 1000000 Miocardiocitos
Calle 7: -HM- Tumor 14 días
Calle 8: Idem 5
Calle 9: Idem 6
Calle 10: Idem 7

Así son las calles.