Semana 10

En nuestra décima semana de Proyecto final (pasantías) el objetivo planteado por nuestra investigadora fue ver si existe contaminación de micoplasma en una linea celular MCF-7. El micoplasma es un genero microbiano de bacterias que carecen de una pared celular, y debido a esta condición de carencia de pared celular, no se ven afectadas por algunas antibioticos como la penicilina. Estas bacterias infectan el citoplasma de la célula.
La técnica a utilizar para el control del micoplasma se denomina: HOECHST. El cual consiste en la utilización de un colorante fluorescente denominado Bisbenzimida que se intercala en el ADN.

La técnica se realiza de la siguiente manera:

1- Sembrar las células sobre cubreobjetos; colocados en una caja de petri; en su medio habitual.

2- Incubar a 37°C en estufa gaseada 5% CO2 en aire hasta llegar a una confluencia del 70% aproximadamente.

3- 3 Lavados con PBS

4- Fijar los preparados con fijador "camoy" (Metanol + Ácido Acético) por 5 minutos.

5- Descartar fijador y dejar secar al aire.

6- Colorear 30 min en oscuridad con Bisbenzimida 5M

7- 3 lavados con PBS 10 min.

8- Observamos el resultado en el Microscopio.

Los resultados que se podrían esperar son:

Positivo: el colorante tiñe el ADN de la célula y el ADN de la bacteria, observandose el núcleo de la célula y un puntillado en el citoplasma, que corresponde a la contaminación con micoplasma.

Negativo: el colorante tiñe solamente el ADN de la célula y el citoplasma no se observa.

Nuestros resultados fueron positivos, por lo que las células fueron desechadas.

¡FELICES VACACIONES.!