Introducción (Paper)

Para ver la introducción en su tamaño original debemos hacer doble click en el extremo superior izquierdo de nuestra pantalla donde dice la palabra "Scribd". Gracias.

Introduccion OK[1] - Upload a Document to Scribd

Read this document on Scribd: Introduccion OK[1]

">

Curriculum Vitae de la Doctora Eulalia de la Torre

Para ver el curriculum en su tamaño original debemos hacer doble click en el extremo superior izquierdo de nuestra pantalla donde dice la palabra "Scribd". Gracias.

CV Eulalia de la Torre[1] - Upload a Document to Scribd

Read this document on Scribd: CV Eulalia de la Torre[1]

">

Semana 10

En nuestra décima semana de Proyecto final (pasantías) el objetivo planteado por nuestra investigadora fue ver si existe contaminación de micoplasma en una linea celular MCF-7. El micoplasma es un genero microbiano de bacterias que carecen de una pared celular, y debido a esta condición de carencia de pared celular, no se ven afectadas por algunas antibioticos como la penicilina. Estas bacterias infectan el citoplasma de la célula.
La técnica a utilizar para el control del micoplasma se denomina: HOECHST. El cual consiste en la utilización de un colorante fluorescente denominado Bisbenzimida que se intercala en el ADN.

La técnica se realiza de la siguiente manera:

1- Sembrar las células sobre cubreobjetos; colocados en una caja de petri; en su medio habitual.

2- Incubar a 37°C en estufa gaseada 5% CO2 en aire hasta llegar a una confluencia del 70% aproximadamente.

3- 3 Lavados con PBS

4- Fijar los preparados con fijador "camoy" (Metanol + Ácido Acético) por 5 minutos.

5- Descartar fijador y dejar secar al aire.

6- Colorear 30 min en oscuridad con Bisbenzimida 5M

7- 3 lavados con PBS 10 min.

8- Observamos el resultado en el Microscopio.

Los resultados que se podrían esperar son:

Positivo: el colorante tiñe el ADN de la célula y el ADN de la bacteria, observandose el núcleo de la célula y un puntillado en el citoplasma, que corresponde a la contaminación con micoplasma.

Negativo: el colorante tiñe solamente el ADN de la célula y el citoplasma no se observa.

Nuestros resultados fueron positivos, por lo que las células fueron desechadas.

¡FELICES VACACIONES.!

Semana 9

En esta semana hicimos las calles del western blot. Teniamos 10 calles debido a que previamennte habíamos utilizado un peine de 8 dientes, quien logro separar el gel en 10 partes.
De esta manera hicimos las calles, sembrando los siguiente en cada una de las calles:
OBJETIVO: Buscamos Metealoproteasa MMP-9

Calle 1:-SD- MFS con LPS (Control)
Calle 2:Marcador Molecular
Calle 3:-SD- MFS sin LPS
Calle 4:-SD- MFS con LPS
Calle 5:-SD- Miocardiocitos
Calle 6:-SD- Miocardiocitos concentrados
Calle 7:-SD-Miocardiocitos "el resto" del filtrado
Calle 8:Control (+)
Calle 9:Idem 5
Calle 10:Idem 6


calle 1:-SD- 24hs (Control)
calle 2:Marcador Molecular
calle 3:-LIS-COntrol
calle 4:-LIS-MFS 6hs
calle 5:-LIS-MFS 24hs
calle 6:-SD- Control
calle 7:-SD-MFS 6hs
calle 8:-SD-MFS 24hs
calle 9:Control (+)
calle 10:Idem 4

Obsercaciones: las puntas(calles 1; 10) no siempre salen bien; estas no llevan anticuerpo

- SD - Sobrenadante - LIS- Lisado
Primer anticuerpo reconoce las proteínas

Segundo anticuerpo reconoce otro anticuerpo (el revelado sale mal)

Resultado: Al llegar al revelado, todo lo que se revela es por presencia del primer anticuerpo, en caso de aparecer revelado algo en el control esta mal.

El segundo que hicimos fue sobre HOMOGENATOS DE PIELES DE ANIMALES
OBJETIVO: Buscamos MMP-9
HM: Homogenatos

Calle 1:Idem 6
Calle 2:Marcador
Calle 3:-HM-
Calle 4: Piel Inoculamos 300000 MFS sin LPS
Calle 5: Piel Inoculamos 300000 MFS con LPS
Calle 6: Piel Inoculamos 500000 MFS sin LPS
Calle 7: Piel Inoculamos 500000 MFS con LPS
Calle 8:-HM- Corazon
Calle 9: Idem 7
Calle 10: Idem 8

Calle 1:
Calle 2:Marcador
Calle 3:-HM- Control
Calle 4: Piel 300000 Miocardiocitos
Calle 5: Piel 500000 Miocardiocitos
Calle 6: Piel 1000000 Miocardiocitos
Calle 7: -HM- Tumor 14 días
Calle 8: Idem 5
Calle 9: Idem 6
Calle 10: Idem 7

Así son las calles.